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细胞计数器_图

发布时间:2020-07-11 17:17 作者:电玩城捕鱼

  三、实验原理 (一)酵母菌大小的测定原理 所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微 尺来测量,先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表 示绝对长度的目镜测微尺,计算后者每格所代表的 实际长度,然后放上待测的标本,用目镜测微尺测 定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数,就可计 算该微生物的大小。酵母菌的直径约8-10μ m。 (二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种,即直接计数法 和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数,能立即得到数值,但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数,反应较真实, 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释,按照规定方法及 计算公式运算后,即可得出实际数值。 四、操作方法 (一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片, 其中央刻有精确的刻度,通常是将5mm划分为50格, 实际每格等于 100μ m 。刻度的大小是随使用的接目 镜和接物镜的放大倍数而改变,用前必须用物镜测微 尺来标定,如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载 玻片,其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度,将长 1mm的直线.目镜测微尺的标定 (1) 取下接目镜,旋下目镜上的目透镜,将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上,使有刻度的一面朝下, 再旋上目透镜,并装入镜筒内。 (2) 将物镜测微尺置于显微镜的载物台上,使有刻度 的一面朝上,同观察标本一样,使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察,对准焦距,待看清物镜测微尺 的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行,并使两尺的左边第一条线相 重合,再向右寻找两尺的另外一条重合线)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。 3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微 尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数 (2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微 尺上每格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( ) (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定 时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换 物镜、目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定。 4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺,换上酵母菌水浸制片。 (2) 测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格, 然后换算出菌体的实际长度。 (3)在同一标本上测定5-10个菌体,求其平均值。 (二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽,构成三个 平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔 为两半,每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格 为计数室,供微生物计数用。这一大方格的长和 宽各为1m,深度为,其体积为0.1mm3。 计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格, 每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中 格,每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一 种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都 是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图。 2.血球计数板的使用 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。 (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每 小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即 可。 (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上 加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖 玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水 纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。 (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要 按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格 (即100个小格)的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大 方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方 和左方线)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公 式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ ml=100 小格内酵母细胞个数/ 100×400×104×稀释倍数 (2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ ml=80 小格内酵母细胞个数/ 80×400×104×稀释倍数 4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬 物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95% 的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。 通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。 若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。 五、思考题及实验作业 1.若更换不同放大倍数的目镜和物镜时,必须用物镜测 微尺标定目镜测微尺,这是为什么? 2.利用血球计数板时,注入的菌液为什么不能过多? 3.测定酵母细胞大小的结果。 (1)接目镜倍数是 ;低倍镜倍数 ;高倍镜倍数 。 (2)低倍镜下,接目镜测微尺 格=物镜测微尺 格。 目镜测微尺每格= μ m。 (3)高倍镜下,接目镜测微尺 格=镜台测微尺 格。 目镜测微尺每格= μ m。 (4)酵母菌测量结果填表 (5)酵母菌直接计数结果报告 每1ml样品含酵母细胞 个。


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